土Solid- Catalase S- CAT
微量法
注意：正式測定前務(wù)必取2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
規(guī)格 ： 100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 × 1 瓶，4℃保存； 臨用前加入29 .7mL 蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑4℃ 保存；
試劑二：粉劑× 1 瓶，4℃保存；臨用前加入1mL 蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存； 試劑三：液體× 1 瓶，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
S-CAT 是土壤微生物代謝的重要酶類，在H2O2 清除系統(tǒng)中具有重要作用。
H2O2 在240nm 下有特征吸收峰，通過測定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長下吸光度的變化，即可 反應(yīng)S-CAT 活性的高低。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板 (UV 板) 和蒸餾水
操作步驟：
-、 樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。
、 測定步驟：
1 、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至240nm ，蒸餾水調(diào)零。
2 、 加樣表
試劑名稱測定管無基質(zhì)管無土管
風(fēng)干土樣 (g)0.030.03
試劑一 (μL)260260
雙蒸水 (μL)260
25℃振蕩培養(yǎng) 20min
試劑二 (μL)101010
混勻 8000g ，25℃離心 5min ，取全部上清
試劑三 (μL)303030
混勻，取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中，240nm 處記錄各管吸光值A(chǔ)。 注意： 每個測定管要設(shè)一個無基質(zhì)管，無土管只要做一管。
三、 S-CAT 活性計算：
A 、用微量石英比色皿測定的計算公式如下
單位的定義：每天每g 風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
計算公式：S-CAT (μmol/d/g) ＝[(A 無土管-A 測定管+A 無基質(zhì)管)×V 反總÷ ( ε×d) × 106]÷W÷T= 16.5 × (A 無土管-A 測定管+A 無基質(zhì)管)
V 反總：反應(yīng)體系總體積，3 × 10-4 L ；ε ：過氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36× 104 L / mol /cm；d： 比
色皿光徑，1cm； T ：反應(yīng)時間，20 min= 1/72d； W：樣本質(zhì)量，0.03g。
B 、用96 孔板測定的計算公式如下
單位的定義：每天每g 風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
計算公式：S-CAT (μmol/d/g) ＝[(A 無土管-A 測定管+A 無基質(zhì)管)×V 反總÷ ( ε×d) × 106]÷W÷T=33 × (A 無土管－A 測定管+A 無基質(zhì)管)
V 反總：反應(yīng)體系總體積，3 × 10-4 L ；ε ：過氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36× 104 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm； T ：反應(yīng)時間，20 min= 1/72d； W：樣品質(zhì)量，0.03g。
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